《生物工程綜合實驗》主要由13個綜合實驗組成;在實驗設計上,每個綜合實驗都以產(chǎn)品生產(chǎn)為主線,綜合利用多種實驗技術(shù),力爭使學生得到多方面的綜合訓練;內(nèi)容上,涵蓋了發(fā)酵工程、基因工程、酶工程、細胞工程、生物分離工程及生物信息學等;應用上,包括了醫(yī)藥、能源、食品等,特別是生物柴油、燃料乙醇、纖維素的利用等目前生物工程領域的研究熱點。教材突出生物工程實驗的綜合性與現(xiàn)代性,適合作為生物工程(技術(shù))專業(yè)高年級本科實驗教學的教科書。
一般認為,生物技術(shù)的發(fā)展經(jīng)歷了傳統(tǒng)生物技術(shù)(釀造)、近代生物技術(shù)(微生物發(fā)酵)、現(xiàn)代生物技術(shù)(生物工程)三個階段。生物工程(bioengineering)是運用生物學、化學和工程學等學科相結(jié)合的方法,利用生物體制造人類所需產(chǎn)品、改造環(huán)境的一門多學科交叉的應用技術(shù)。生物工程已經(jīng)在食品、醫(yī)藥、輕工、農(nóng)業(yè)、環(huán)境保護、能源等領域發(fā)揮了重要作用,已經(jīng)產(chǎn)生了巨大的經(jīng)濟效益與社會效益。20世紀70年代開始,轉(zhuǎn)基因技術(shù)、系統(tǒng)生物學、生物信息學、化學生物學、基因組學、轉(zhuǎn)錄組學、蛋白質(zhì)組學、代謝組學等學科或技術(shù)的建立與發(fā)展極大地推動了生物工程的快速發(fā)展。研究對象從微生物擴展到動植物細胞、微藻,研究領域從陸地擴展到海洋、太空。在微生物工程(發(fā)酵工程)、酶工程、基因工程、細胞工程、生物反應工程、生物分離工程等經(jīng)典生物工程技術(shù)基礎上,誕生了代謝工程、蛋白質(zhì)工程、組織工程等新型生物工程技術(shù)。目前,生物工程已經(jīng)成為與微電子技術(shù)、新材料技術(shù)和新能源技術(shù)并列的重要科學技術(shù),對于解決人類面臨的糧食、健康、環(huán)境、能源等重大問題將發(fā)揮越來越重要的作用。
生物工程專業(yè)是我國眾多高校優(yōu)先和重點發(fā)展的學科專業(yè)之一,生物工程專業(yè)教材的系統(tǒng)化建設是培養(yǎng)高質(zhì)量生物工程專業(yè)人才的前提。目前生物工程一體化的系列教材相對欠缺。為滿足我國普通高等教育的需要,上海交通大學受科學出版社委托,組織上海交通大學、華南理工大學、東華大學等一批工作在生物技術(shù)、生物工程教學、科研第一線的教師編寫本套“生物技術(shù)與生物工程專業(yè)能力培養(yǎng)型系列教材”。全套計劃由12部教材組成,其中2部是在第一版基礎上的修訂版,《細胞工程》(第二版)人選普通高等教育“十一五”國家級規(guī)劃教材。
叢書序
前言
綜合實驗1 青霉素的發(fā)酵生產(chǎn)及半合成抗生素的制備
實驗1-1 青霉素的發(fā)酵生產(chǎn)
實驗1-2 發(fā)酵體系中氨態(tài)氮含量的測定
實驗1-3 青霉素效價的測定
實驗1-4 青霉素;府a(chǎn)生菌的篩選
實驗1-5 青霉素;傅拿富顪y定
實驗1-6 青霉素;傅陌l(fā)酵生產(chǎn)與分離純化
實驗1-7 青霉素;傅墓潭ɑ
實驗1-8 固定化青霉素;复呋苽7-ADCA
綜合實驗2 微生物發(fā)酵生產(chǎn)油脂及生物柴油的制備
實驗2-1 微生物發(fā)酵產(chǎn)油脂
實驗2-2 油脂的提取與成分分析
實驗2-3 酶法轉(zhuǎn)化生成生物柴油
綜合實驗3 米超氧化物歧化酶提取與固定化酵母乙醇發(fā)酵
實驗3-1 玉米超氧化物歧化酶的提取
實驗3-2 超氧化物歧化酶(SOD)活力測定
實驗3-3 玉米粉的液化、糖化
實驗3-4 固定化酵母乙醇發(fā)酵
實驗3-5 乙醇發(fā)酵分析
綜合實驗4 乳酸發(fā)酵及獼猴桃汁乳酸發(fā)酵飲料的制備
實驗4-1 乳酸菌的分離與篩選
實驗4-2 獼猴桃汁乳酸發(fā)酵飲料的制備
實驗4-3 細菌L-乳酸發(fā)酵
綜合實驗5 黑曲霉發(fā)酵生產(chǎn)檸檬酸
實驗5-1 黑曲霉孢子的制備
實驗5-2 種子培養(yǎng)
實驗5-3 發(fā)酵罐的構(gòu)造認識及空消
實驗5-4 薯干粉/玉米粉液體深層發(fā)酵
實驗5-5 檸檬酸發(fā)酵分析
實驗5-6 發(fā)酵液的中和、酸解
實驗5-7 粗檸檬酸溶液的脫色及離子交換凈化
實驗5-8 檸檬酸溶液的濃縮、結(jié)晶及干燥
綜合實驗6 纖維素酶的固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)和分離純化
實驗6-1 纖維素酶產(chǎn)生菌的選育
實驗6-2 纖維素酶的活性測定
實驗6-3 固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶
實驗6-4 纖維素酶的分離純化
實驗6-5 纖維素酶糖化玉米芯發(fā)酵生產(chǎn)乙醇
綜合實驗7 基因工程菌發(fā)酵生產(chǎn)重組核糖核酸酶A
實驗7-1 重組核糖核酸酶A表達載體構(gòu)建
實驗7-2 重組核糖核酸酶A誘導表達
實驗7-3 重組核糖核酸酶A親和純化
實驗7-4 重組核糖核酸酶A活性鑒定
綜合實驗8 幾丁質(zhì)酶的發(fā)酵生產(chǎn)及異源表達
實驗8-1 幾丁質(zhì)酶產(chǎn)生菌的篩選
實驗8-2 產(chǎn)幾丁質(zhì)酶培養(yǎng)基的統(tǒng)計學優(yōu)化
實驗8-3 幾丁質(zhì)酶的分離純化
實驗8-4 幾丁質(zhì)酶的酶學性質(zhì)
實驗8-5 幾丁質(zhì)酶基因的克隆與異源表達
綜合實驗9 木瓜蛋白酶的提取制備及殼聚糖的酶法水解
實驗9-1 木瓜蛋白酶的提取
實驗9-2 木瓜蛋白酶活力測定
實驗9-3 木瓜蛋白酶的分離純化
實驗9-4 木瓜蛋白酶水解殼聚糖
實驗9-5 設計實驗
綜合實驗10 利用固定化酵母細胞生產(chǎn)1,6-二磷酸果糖
實驗10-1 酵母細胞的固定化
實驗10-2 固定化酵母催化磷酸化反應
實驗10-3 固定化酵母細胞連續(xù)制備1,6-二磷酸果糖
實驗10-4 離子交換法提取1,6-二磷酸果糖
綜合實驗11 螺旋藻氣升式光生物反應器培養(yǎng)及藻藍蛋白的提取純化
實驗11-1 螺旋藻氣升式光生物反應器培養(yǎng)
實驗11-2 螺旋藻藻藍蛋白的提取
實驗11-3 螺旋藻藻藍蛋白的純化
實驗11-4 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳測定藻藍蛋白的相對分子質(zhì)量
綜合實驗12 紅豆杉細胞培養(yǎng)及次級代謝產(chǎn)物的檢測分析
實驗12-1 紅豆杉細胞培養(yǎng)
實驗12-2 紅豆杉細胞培養(yǎng)物中紫杉烷的分離鑒定
實驗12-3 紅豆杉細胞提取物對腫瘤細胞的作用
綜合實驗13 不同來源細菌的系統(tǒng)發(fā)育關系分析
實驗13-1 細菌總DNA提取與瓊脂糖凝膠電泳檢測
實驗13-2 16S rDNA的PCR擴增與瓊月旨糖凝膠電泳
實驗13-3 16S rDNA序列的克隆
實驗13-4 陽性克隆的篩選
實驗13-5 系統(tǒng)發(fā)育樹分析
參考文獻
附錄1 培養(yǎng)基和試劑、溶液的配制
附錄2 緩沖液的配制
附錄3 硫酸銨飽和度的常用表
乙醇(酒精)是用途最廣和用量最大的有機溶劑之一。發(fā)酵法生產(chǎn)乙醇由于原料來源于可再生的植物,所以乙醇被視為可長期持續(xù)供應的清潔能源,加上世界正面臨的能源危機和環(huán)境污染,使得燃料乙醇發(fā)酵研究和產(chǎn)業(yè)化具有很大的戰(zhàn)略意義和社會效益。
。ǘ┤剂弦掖嫉陌l(fā)酵生產(chǎn)
1.燃料乙醇的生產(chǎn)原料
燃料乙醇的生產(chǎn)原料有三類:一是糖類,來自甘蔗、甜菜等;二是谷物淀粉類,來自玉米、稻谷等;三是纖維素類,來自秸稈、蔗渣等。用糖類生產(chǎn)乙醇是工藝最為簡單、成本最為低廉的方法,目前在南美洲如巴西、阿根廷等廣泛使用。以谷物淀粉作原料是目前北美和歐洲等國廣泛使用的方法。以植物秸稈等纖維素為原料生產(chǎn)乙醇是最具挑戰(zhàn)性的課題。不同的原料發(fā)酵生產(chǎn)燃料乙醇,生產(chǎn)方式略有不同,因而各有其優(yōu)缺點。
2.燃料乙醇發(fā)酵微生物
乙醇發(fā)酵微生物包括代謝葡萄糖的酵母、代謝葡萄糖的細菌及代謝木糖的微生物。常用于葡萄糖發(fā)酵生產(chǎn)乙醇的酵母有:啤酒酵母、葡萄汁酵母、裂殖酵母及克魯維酵母等。這些酵母均屬兼性厭氧菌,在酵母生長期需要一定的氧氣,在乙醇發(fā)酵階段則需要厭氧條件以提高乙醇產(chǎn)率。通過酵母發(fā)酵生產(chǎn)乙醇時,發(fā)酵液pH為3~4,因此染菌機會較少,且除乙醇外幾乎沒有副產(chǎn)物。但酵母大多不耐高溫,且不能直接利用淀粉或纖維素為原料進行發(fā)酵。通過細菌發(fā)酵生產(chǎn)乙醇時,代謝速度快,發(fā)酵周期短,且生成的菌體約為酵母的一半,所以乙醇的得率較高。例如,運動發(fā)酵單胞菌(zymomonas mobilis)的生長速率、底物消耗速率、產(chǎn)物生成速率都高于酵母發(fā)酵,而細胞產(chǎn)率則低于酵母。