《病原生物學(xué)與免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)》分為四部分，緒言主要介紹本門課程的教學(xué)目的和要求以及實(shí)驗(yàn)室規(guī)則和實(shí)驗(yàn)室生物安全；第一篇主要介紹三門課程的基本實(shí)驗(yàn)，包括醫(yī)學(xué)免疫學(xué)、病原生物學(xué)和人體寄生蟲學(xué)基本實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目，內(nèi)容包括一些新的實(shí)驗(yàn)技術(shù)；第二篇為綜合性和設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)，該篇首先介紹了感染性疾病病原體的檢測(cè)方法和常用的用于病原體檢測(cè)的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，其次羅列了經(jīng)典的感染性疾病臨床病例，目的是在病例討論基礎(chǔ)之上，圍繞病原體的檢測(cè)，綜合運(yùn)用所學(xué)的基礎(chǔ)知識(shí)和基本實(shí)驗(yàn)技能設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)；第三篇是創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)相關(guān)內(nèi)容，主要介紹了國(guó)家創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的目的和要求以及項(xiàng)目申請(qǐng)書的格式和內(nèi)容，該篇主要針對(duì)一些對(duì)科學(xué)研究特別感興趣的同學(xué)。
緒言（1）
一、病原生物學(xué)與免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵螅?）
二、實(shí)驗(yàn)室生物安全（1）
三、實(shí)驗(yàn)室規(guī)章制度（2）
第一篇基本實(shí)驗(yàn)
第一章免疫學(xué)基本實(shí)驗(yàn)（3）
第一節(jié)抗體的制備（3）
一、多克隆抗體（3）
實(shí)驗(yàn)1-1多克隆抗體的制備（3）
實(shí)驗(yàn)1-2抗體的提取與純化（鹽析沉淀法）（4）
二、單克隆抗體（5）
第二節(jié)凝集實(shí)驗(yàn)（7）
一、直接凝集實(shí)驗(yàn)（7）
實(shí)驗(yàn)1-3細(xì)菌的鑒定（8）
實(shí)驗(yàn)1-4人ABO血型鑒定（9）
實(shí)驗(yàn)1-5試管凝集實(shí)驗(yàn)（肥達(dá)反應(yīng)）（10）
二、間接凝集實(shí)驗(yàn)（11）
實(shí)驗(yàn)1-6間接凝集實(shí)驗(yàn)（12）
實(shí)驗(yàn)1-7間接凝集抑制實(shí)驗(yàn)（妊娠實(shí)驗(yàn)）（12）
實(shí)驗(yàn)1-8協(xié)同凝集實(shí)驗(yàn)（13）
第三節(jié)沉淀實(shí)驗(yàn)（14）
實(shí)驗(yàn)1-9單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)（15）
實(shí)驗(yàn)1-10雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)（16）
實(shí)驗(yàn)1-11免疫電泳（17）
實(shí)驗(yàn)1-12對(duì)流免疫電泳（18）
實(shí)驗(yàn)1-13火箭免疫電泳（19）
第四節(jié)補(bǔ)體相關(guān)實(shí)驗(yàn)（21）
實(shí)驗(yàn)1-14血清總補(bǔ)體活性測(cè)定（21）
實(shí)驗(yàn)1-15補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)（22）
第五節(jié)免疫細(xì)胞相關(guān)實(shí)驗(yàn)（26）
實(shí)驗(yàn)1-16外周血單個(gè)核細(xì)胞的分離（26）
實(shí)驗(yàn)1-17巨噬細(xì)胞吞噬功能測(cè)定（大吞噬試驗(yàn)）（28）
實(shí)驗(yàn)1-18中性粒細(xì)胞吞噬功能測(cè)定（小吞噬試驗(yàn)）（29）
實(shí)驗(yàn)1-19NK細(xì)胞活性測(cè)定（30）
實(shí)驗(yàn)1-20E玫瑰花環(huán)試驗(yàn)（31）
實(shí)驗(yàn)1-21間接免疫熒光技術(shù)檢測(cè)T細(xì)胞亞群（CD4）（33）
試驗(yàn)1-22淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)（34）
實(shí)驗(yàn)1-23ELISPOT（35）
實(shí)驗(yàn)1-24溶血空斑試驗(yàn)（38）
第六節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)（40）
實(shí)驗(yàn)一、酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（40）
實(shí)驗(yàn)1-25免疫斑點(diǎn)實(shí)驗(yàn)（41）
實(shí)驗(yàn)1-26間接ELISA（42）
實(shí)驗(yàn)1-27雙抗體夾心法（44）
二、膠體金標(biāo)記技術(shù)（45）
實(shí)驗(yàn)1-28膠體金的制備（45）
實(shí)驗(yàn)1-29膠體金標(biāo)記蛋白的制備（46）
實(shí)驗(yàn)1-30膠體金標(biāo)記技術(shù)常用方法（47）
三、熒光抗體標(biāo)記技術(shù)（48）
實(shí)驗(yàn)1-31熒光抗體制備技術(shù)（50）
實(shí)驗(yàn)1-32間接法檢測(cè)抗核抗體（50）
四、放射免疫標(biāo)記技術(shù)（51）
五、化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)（52）
第七節(jié)超敏反應(yīng)（53）
實(shí)驗(yàn)1-33豚鼠過(guò)敏試驗(yàn)（53）
第二章醫(yī)學(xué)微生物學(xué)基本實(shí)驗(yàn)（54）
第一節(jié)細(xì)菌形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察（54）
實(shí)驗(yàn)2-1顯微鏡的使用（54）
實(shí)驗(yàn)2-2懸滴法觀察細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)（56）
實(shí)驗(yàn)2-3革蘭染色法（56）
實(shí)驗(yàn)2-4細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)的染色法（59）
第二節(jié)細(xì)菌的人工培養(yǎng)（62）
一、細(xì)菌的培養(yǎng)基（62）
實(shí)驗(yàn)2-5細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基的制備方法（62）
二、細(xì)菌的接種及生長(zhǎng)現(xiàn)象觀察（65）
實(shí)驗(yàn)2-6平板培養(yǎng)基接種法（65）
實(shí)驗(yàn)2-7試管培養(yǎng)基接種法（70）
實(shí)驗(yàn)2-8細(xì)菌計(jì)數(shù)（74）
第三節(jié)細(xì)菌代謝產(chǎn)物的檢測(cè)（79）
一、細(xì)菌分解代謝產(chǎn)物的檢測(cè)（79）
實(shí)驗(yàn)2-9碳水化合物代謝試驗(yàn)（79）
實(shí)驗(yàn)2-10蛋白質(zhì)與氨基酸代謝試驗(yàn)（82）
實(shí)驗(yàn)2-11碳源與氮源利用試驗(yàn)（84）
實(shí)驗(yàn)2-12其他酶類試驗(yàn)（84）
二、細(xì)菌合成代謝產(chǎn)物的檢測(cè)（85）
實(shí)驗(yàn)2-13侵襲性酶的檢測(cè)（85）
實(shí)驗(yàn)2-14毒素的檢測(cè)（87）
第四節(jié)理化因素對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的影響（90）
實(shí)驗(yàn)2-15高壓蒸汽滅菌法（90）
實(shí)驗(yàn)2-16紫外線殺菌試驗(yàn)（91）
實(shí)驗(yàn)2-17手指皮膚消毒試驗(yàn)（91）
實(shí)驗(yàn)2-18藥物敏感試驗(yàn)（紙片瓊脂擴(kuò)散法）（92）
實(shí)驗(yàn)2-19藥敏試驗(yàn)（稀釋法）（93）
實(shí)驗(yàn)2-20聯(lián)合藥物敏感試驗(yàn)（97）
第五節(jié)細(xì)菌的遺傳變異（98）
實(shí)驗(yàn)2-21細(xì)菌R質(zhì)粒接合傳遞實(shí)驗(yàn)（98）
實(shí)驗(yàn)2-22細(xì)菌鞭毛變異（99）
第六節(jié)特殊細(xì)菌的染色方法（99）
實(shí)驗(yàn)2-23抗酸染色法（99）
實(shí)驗(yàn)2-24異染顆粒染色法觀察棒狀桿菌（100）
第七節(jié)螺旋體觀察（102）
實(shí)驗(yàn)2-25Fontana鍍銀染色法鏡檢鉤端螺旋體（102）
實(shí)驗(yàn)2-26剛果紅負(fù)染色法觀察奮森疏螺旋體（103）
第八節(jié)病毒學(xué)實(shí)驗(yàn)（104）
實(shí)驗(yàn)2-27病毒蝕斑實(shí)驗(yàn)（104）
實(shí)驗(yàn)2-28病毒血凝實(shí)驗(yàn)及血凝抑制試驗(yàn)（105）
實(shí)驗(yàn)2-29病毒中和實(shí)驗(yàn)（106）
第九節(jié)真菌相關(guān)實(shí)驗(yàn)（108）
實(shí)驗(yàn)2-30真菌形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察（108）
實(shí)驗(yàn)2-31真菌的培養(yǎng)（109）
第三章人體寄生蟲學(xué)基本實(shí)驗(yàn)（112）
第一節(jié)人體寄生蟲形態(tài)觀察（112）
實(shí)驗(yàn)3-1人體寄生蟲形態(tài)觀察（112）
第二節(jié)寄生蟲常用診斷技術(shù)（131）
實(shí)驗(yàn)3-2糞便直接涂片法檢查蠕蟲卵（131）
實(shí)驗(yàn)3-3飽和鹽水漂浮法檢查糞便中鉤蟲卵（132）
實(shí)驗(yàn)3-4幼蟲孵化法（133）
實(shí)驗(yàn)3-5肛門試紙法（135）
實(shí)驗(yàn)3-6十二指腸分泌物檢查（136）
實(shí)驗(yàn)3-7陰道分泌物檢查（137）
實(shí)驗(yàn)3-8血液檢查（138）
實(shí)驗(yàn)3-9毛囊或皮脂腺（蠕形螨）檢查（140）
第三節(jié)寄生蟲感染特殊免疫學(xué)檢測(cè)方法（141）
實(shí)驗(yàn)3-10皮內(nèi)試驗(yàn)（141）
實(shí)驗(yàn)3-11血吸蟲環(huán)卵沉淀實(shí)驗(yàn)（142）
實(shí)驗(yàn)3-12診斷弓形蟲感染的染色實(shí)驗(yàn)（143）
第二篇綜合、設(shè)計(jì)型實(shí)驗(yàn)
第四章感染性疾病的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)概述（145）
第一節(jié)細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診斷（145）
一、標(biāo)本的采集（145）
二、細(xì)菌的檢測(cè)（146）
三、細(xì)菌感染的血清學(xué)診斷（147）
四、常見(jiàn)致病菌的鑒定流程（147）
第二節(jié)病毒感染的實(shí)驗(yàn)室診斷（148）
一、標(biāo)本的采集與送檢（148）
二、病毒的形態(tài)學(xué)檢查法（149）
實(shí)驗(yàn)三、病毒抗原的直接檢出（149）
四、檢測(cè)病毒核酸（150）
五、病毒感染的血清學(xué)診斷（150）
六、病毒分離培養(yǎng)（151）
第三節(jié)真菌感染的實(shí)驗(yàn)室診斷（153）
一、標(biāo)本的采集（153）
二、真菌的直接鏡檢（153）
三、真菌的分離培養(yǎng)（154）
四、血清學(xué)診斷（154）
五、核酸雜交探針技術(shù)（154）
第四節(jié)寄生蟲感染的實(shí)驗(yàn)室診斷（154）
一、病原學(xué)檢查方法（154）
二、常用于寄生蟲感染診斷的免疫學(xué)技術(shù)（156）
三、寄生蟲的核酸檢測(cè)（156）
第五章綜合、設(shè)計(jì)型實(shí)驗(yàn)相關(guān)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)（158）
實(shí)驗(yàn)5-1聚合酶鏈反應(yīng)（158）
實(shí)驗(yàn)5-2Southern雜交（160）
實(shí)驗(yàn)5-3蛋白質(zhì)印跡（163）
第六章感染性疾病病例分析及病原體檢測(cè)（169）
第三篇?jiǎng)?chuàng)新性實(shí)驗(yàn)相關(guān)內(nèi)容
一、創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)選題原則（180）
二、實(shí)施原則（180）
三、對(duì)學(xué)生的要求（180）
四、文獻(xiàn)檢索（181）
附一：國(guó)家級(jí)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃指南（181）
一、計(jì)劃目標(biāo)（181）
二、計(jì)劃內(nèi)容（181）
三、參與高校（181）
四、計(jì)劃管理（182）
五、項(xiàng)目管理（182）
六、學(xué)校工作（182）
附二：大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目申報(bào)書（184）
填寫說(shuō)明（185）
參考文獻(xiàn)（188）
彩圖
緒言
一、病原生物學(xué)與免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵?br />
（1）通過(guò)實(shí)驗(yàn)觀察和實(shí)驗(yàn)操作，鞏固并加深對(duì)醫(yī)學(xué)免疫學(xué)和病原生物學(xué)基本理論知識(shí)的理解。
（2）掌握病原生物學(xué)與免疫學(xué)的基本操作技術(shù)；樹(shù)立牢固的無(wú)菌觀念，掌握生物安全的基本知識(shí)和病原生物學(xué)中常見(jiàn)的無(wú)菌操作技術(shù)，為以后的臨床操作奠定堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。
（3）熟悉感染性疾病常用的診斷方法和手段，了解病原生物學(xué)和免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)的新進(jìn)展。
（4）培養(yǎng)學(xué)生具有從事科學(xué)實(shí)驗(yàn)的能力，能夠獨(dú)立觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果、整理分析實(shí)驗(yàn)資料、總結(jié)書寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告和論文的能力。培養(yǎng)學(xué)生一定的創(chuàng)新能力，能夠提出問(wèn)題，分析問(wèn)題并設(shè)計(jì)方案解決問(wèn)題。培養(yǎng)學(xué)生嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)態(tài)度和作風(fēng)，培養(yǎng)學(xué)生不僅具有獨(dú)立解決問(wèn)題的能力，同時(shí)也培養(yǎng)學(xué)生團(tuán)結(jié)協(xié)作精神。
二、實(shí)驗(yàn)室生物安全
國(guó)家根據(jù)病原微生物的傳染性、感染后對(duì)個(gè)體或者群體的危害程度，將病原微生物分為四類（表0-1）：表0-1病原微生物生物危害的類別劃分類別劃分標(biāo)準(zhǔn)舉例一類能夠引起人類或者動(dòng)物非常嚴(yán)重疾病的微生物，以及我國(guó)尚未發(fā)現(xiàn)或者已經(jīng)宣布消滅的微生物埃博拉病毒、沙粒病毒、天花病毒等二類能夠引起人類或者動(dòng)物嚴(yán)重疾病，比較容易直接或者間接在人與人、動(dòng)物與人、動(dòng)物與動(dòng)物間傳播的微生物如結(jié)核分枝桿菌、布魯氏菌、圣路易斯腦炎病毒、朊粒等三類能夠引起人類或者動(dòng)物疾病，但一般情況下對(duì)人、動(dòng)物或者環(huán)境不構(gòu)成嚴(yán)重危害，傳播風(fēng)險(xiǎn)有限，實(shí)驗(yàn)室感染后很少引起嚴(yán)重疾病，并且具備有效治療和預(yù)防措施的微生物乙型肝炎病毒、人類免疫缺陷病毒、沙門菌、志賀菌、梅毒螺旋體、葡萄球菌等四類在通常情況下不會(huì)引起人類或者動(dòng)物疾病的微生物如枯草桿菌、犬肝炎病毒等一類、二類病原微生物統(tǒng)稱為高致病性病原微生物。
根據(jù)微生物實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展工作的性質(zhì)、接觸的病原體生物危害程度、采取生物安全措施的不同分為4級(jí)（表0-2）：
表0-2病原微生物實(shí)驗(yàn)室分級(jí)級(jí)別主要用途實(shí)驗(yàn)條件一級(jí)從事基礎(chǔ)教學(xué)與研究，接觸四類生物危害微生物開(kāi)放式工作臺(tái)和規(guī)范的微生物操作技術(shù)續(xù)表級(jí)別主要用途實(shí)驗(yàn)條件二級(jí)從事實(shí)驗(yàn)健康服務(wù)、診斷、研究、接觸三類生物危害微生物除了開(kāi)放式長(zhǎng)形工作臺(tái)還應(yīng)配置生物安全柜，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有生物危害標(biāo)記，操作人員應(yīng)身著防護(hù)服，有規(guī)范的病原微生物操作技術(shù)三級(jí)從事特殊診斷與服務(wù)，接觸二類生物危害微生物需要生物安全柜和其他操作所需的基本裝置，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有生物危害標(biāo)記，操作人員身著特殊防護(hù)服，規(guī)范的微生物操作技術(shù)，人員進(jìn)入受限，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)有定向氣流四級(jí)從事危險(xiǎn)病原體操作，接觸一類病原微生物應(yīng)有配套的生物安全柜，人員身著帶正壓的連衣褲，實(shí)驗(yàn)室空氣經(jīng)過(guò)濾，配備帶雙門的高壓滅菌器，除了三級(jí)防護(hù)措施外，人員進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室時(shí)，應(yīng)經(jīng)過(guò)密封的過(guò)渡艙，離開(kāi)時(shí)應(yīng)經(jīng)風(fēng)淋，生物廢棄物應(yīng)經(jīng)特殊處理
三、實(shí)驗(yàn)室規(guī)章制度
病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的對(duì)象大多為病原微生物，有的具有一定的感染性，因此要求進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室后必須嚴(yán)格遵守以下實(shí)驗(yàn)室規(guī)則：
（1）每次進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室必須穿白大褂，不必要的物品不得帶入實(shí)驗(yàn)室，必須帶入的書籍和文具等應(yīng)放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)下的抽屜里，以免受到污染。
（2）實(shí)驗(yàn)室內(nèi)禁止飲食、喝水、抽煙，不得高聲談笑或隨便走動(dòng)，務(wù)必關(guān)閉手機(jī)鈴聲，上課期間不得使用手機(jī)。
（3）各種實(shí)驗(yàn)物品應(yīng)按指定地點(diǎn)存放，用過(guò)的器材必須放入消毒缸內(nèi)，禁止隨意放于桌上及沖入水槽。
（4）須送培養(yǎng)箱培養(yǎng)的物品，應(yīng)做好標(biāo)記后送到指定地點(diǎn)。
（5）實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)生差錯(cuò)或意外事故時(shí)，應(yīng)立即報(bào)告老師，并在老師的指導(dǎo)下進(jìn)行正確的處理，禁止隱瞞或擅自處理。如有傳染性的材料污染桌面、地面等，應(yīng)立即用規(guī)定濃度的消毒液浸泡污染部位，作用5～10min后方可抹去。如手被活菌污染也應(yīng)使用合適濃度的消毒液浸泡5～10min后，再以自來(lái)水反復(fù)沖洗。
（6）愛(ài)護(hù)室內(nèi)儀器設(shè)備，嚴(yán)格按照儀器的操作規(guī)則使用，尤其是顯微鏡，使用油鏡頭后必須擦凈鏡油。節(jié)約使用實(shí)驗(yàn)材料，不慎損壞了器材等，應(yīng)主動(dòng)報(bào)告老師并進(jìn)行相應(yīng)清理。
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