前言
概述 1
一、生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課的性質(zhì)、任務(wù)與目的 1
二、生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室安全與規(guī)則 1
三、實(shí)驗(yàn)報(bào)告書寫 2
第一章 基本實(shí)驗(yàn)操作與常用技術(shù)及儀器的使用 3
第一節(jié) 基本實(shí)驗(yàn)操作 3
一、玻璃器皿的洗滌與干燥 3
二、移液器的使用 4
三、液體的混勻 6
四、沉淀的分離 6
五、常用生物材料的處理 7
第二節(jié) 常用技術(shù)及儀器的使用 9
一、離心技術(shù)與離心機(jī) 9
二、分光光度分析技術(shù)與分光光度計(jì)及酶標(biāo)儀 10
三、電泳技術(shù)與電泳儀 12
四、層析技術(shù)與層析柱 16
五、體外DNA擴(kuò)增技術(shù)與PCR儀 20
第二章 經(jīng)典驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn) 26
實(shí)驗(yàn)一 蛋白質(zhì)的鹽析作用 26
實(shí)驗(yàn)二 乳酸脫氫酶及其輔酶Ⅰ的作用 27
實(shí)驗(yàn)三 血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性的測(cè)定 29
實(shí)驗(yàn)四 血糖濃度測(cè)定 32
一、Folin-吳氏法 32
二、葡萄糖氧化酶偶聯(lián)法（GOD-POD法） 34
實(shí)驗(yàn)五 胰島素及腎上腺素對(duì)血糖濃度的影響 36
實(shí)驗(yàn)六 運(yùn)動(dòng)對(duì)尿中乳酸含量的影響 37
實(shí)驗(yàn)七 酮體的生成和利用 39
實(shí)驗(yàn)八 膽固醇提取定性 40
實(shí)驗(yàn)九 血清總膽固醇的測(cè)定 42
一、醋酐-硫酸單一試劑顯色法測(cè)定總膽固醇 42
二、氧化酶法測(cè)定血清總膽固醇 43
第三章 綜合性實(shí)驗(yàn) 45
實(shí)驗(yàn)十 蛋白質(zhì)含量的測(cè)定 45
一、紫外分光測(cè)定法 45
二、Lowry法測(cè)定蛋白質(zhì)含量 46
三、考馬斯亮藍(lán)法 48
實(shí)驗(yàn)十一 血清LDH同工酶譜分析 49
一、乙酸纖維素薄膜電泳法 50
二、瓊脂糖凝膠電泳法 52
實(shí)驗(yàn)十二 堿性磷酸酶Km值的測(cè)定 55
實(shí)驗(yàn)十三 堿性磷酸酶分離純化及比活性的測(cè)定 57
一、堿性磷酸酶的提取分離和純化 58
二、堿性磷酸酶比活性的測(cè)定 60
實(shí)驗(yàn)十四 DNA瓊脂糖凝膠電泳 63
實(shí)驗(yàn)十五 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)（PCR）體外擴(kuò)增DNA 64
實(shí)驗(yàn)十六 質(zhì)粒DNA的制備（堿變性法） 66
實(shí)驗(yàn)十七 血清蛋白質(zhì)的電泳分離 69
一、血清蛋白質(zhì)乙酸纖維素薄膜電泳 69
二、聚丙烯酰胺凝膠電泳（圓盤電泳） 71
實(shí)驗(yàn)十八 SDS-PAGE電泳測(cè)定蛋白質(zhì)的相對(duì)分子量 75
實(shí)驗(yàn)十九 蛋白質(zhì)印跡 79
第四章 研究性實(shí)驗(yàn) 82
實(shí)驗(yàn)二十 凝膠過濾層析法分離純化脲酶 82
實(shí)驗(yàn)二十一 離子交換層析法分離血清蛋白質(zhì) 86
實(shí)驗(yàn)二十二 RT-PCR技術(shù) 87
一、總RNA的提取 87
二、RT-PCR 89
實(shí)驗(yàn)二十三 真核生物基因組DNA的提取與鑒定 90
實(shí)驗(yàn)二十四 基因克隆及蛋白原核表達(dá) 92
第五章 創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn) 96
實(shí)驗(yàn)二十五食管癌PAX9基因的克隆及重組載體構(gòu)建 96
實(shí)驗(yàn)二十六 支架蛋白R(shí)ACK1小干擾RNA抑制卵巢癌細(xì)胞CAOV3的增殖、遷移和侵襲 102
附錄 106
附錄1 常用溶液的配制 106
附錄2 常用培養(yǎng)基的配制 111
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